Kako ELISA kompleti rade

Dvostruka metoda sendviča antitijela 1. Pakovanje: Sa 0,05MPH9. karbonatno pakovanje je puferovano da se antitelo razblaži do sadržaja proteina od 1 do 10 µg/ml. Dodajte 0,1 ml, 4 stepena C preko noći, u reakcione rupe svake polistirenske ploče. Sledećeg dana bacite rastvor u otvor i isperite ga 3 puta puferom za pranje svaki put po 3 minuta.

(skraćeno, pranje, isto ispod). 2. Dodaj uzorak: Dodajte određeno razrjeđenje uzorka za testiranje 0,1 ml u gore-navedenu upakovanu reakcijsku rupu, inkubirajte 1 sat na 37 stepeni C. Zatim operite.

(Istovremeno napravite praznu rupu, negativnu kontrolnu rupu i rupicu pozitivne kontrole). 3. Dodajte enzim-obilježena antitijela: U svaku reakcijsku rupu dodajte svježe razrijeđeno enzim-obilježeno antitijelo (razrjeđenje nakon titracije) 0,1 ml.

Inkubirajte 0,5 do 1 sat na 37 stepeni C i operite.

4. Dodavanje supstrata u tečnoj boji: dodajte privremeni preparat rastvora TMB supstrata 0,1 ml, 37 stepeni C 10 do 30 minuta u svaku reakcijsku rupu.

5. Završna reakcija: Dodajte 2M sumporne kiseline 0,05 ml u svaku reakcijsku rupu. 6. Rezultati određuju: mogu biti na bijeloj pozadini, direktno golim okom da se vide rezultati: što je tamnija boja unutar reakcijske rupe, jači je pozitivni stepen, negativna reakcija je bezbojna ili vrlo plitka, ovisno o boji, boja se odražava u dubini, do

Od skenirana vrijednost: na ELISA testeru, na 450 nm (ako je BTS prikazivanje boja, onda 410 nm), unesena nulta prazna kontrolna rupa za mjerenje OD vrijednosti svake rupe, ako je veća od specificirane negativne kontrolne vrijednosti OD od 2,1 puta, odnosno pozitivno.

Indirektno pravo

1. Koristite pakovanje za puferovanje da razblažite poznati antigen na 1 do 10 mg/ml, po rupi plus 0,1 ml, 4 stepena C preko noći;

2. Operite 3 puta sledećeg dana;

3. Dodajte određeno razrjeđenje uzorka (nepoznato antitijelo) 0,1 ml u gore-navedenu upakovanu reakcijsku rupu, inkubirajte 1 sat na 37 stepeni C, operite;

4. (i prazna, negativna i pozitivna kontrola rupe) u reakcionu rupu dodati svježe razrijeđeno enzimsko obilježje drugog antitijela (anti-antitijelo) 0,1 ml;

5,37 stepeni C inkubacija 35-60 minuta, pranje;

6.'Posljednji put kada ste se prali sa DDW. Preostali koraci su isti kao "sendvič metoda dvostrukih antitijela" od 4, 5, 6.